Los autores sitúan la acción en Londres en la corte del rey Enrique VIII, hacia 1536..
Acto I
Sala en el castillo de Windsor, en los aposentos de la Reina.
Los cortesanos están inquietos: saben que Enrico se ha enamorado de otra mujer, cuya identidad no se conoce. Entra Giovanna Seymour, doncella de la reina Anna Bolena, quien es en realidad la nueva favorita del monarca. Esta teme que la reina sospeche y se muestra contrariada entre el amor y el sufrimiento de su señora.
Entra Anna, muy turbada, y busca en vano disimular su pena. Ordena a su paje Smeton que con su canto alegre el lugar. Éste, secretamente enamorado de la Reina, canta una canción de amor, pero Anna lo hace callar: la melodía le trajo recuerdos del pasado. Como el Rey aún no se hizo presente, Anna exhorta a los cortesanos a regresar a sus habitaciones. Luego se confiesa con Giovanna y le aconseja no caer bajo la fascinación del poder, como le ha sucedido a ella.
Dividida entre la amistad y el amor por el Rey, Giovanna se queda sola. Aparece este, que luego de prometer el trono a la joven la acusa de no amarlo. Ella trata de disuadirlo de su plan, pero no lo logra: Enrico le manifiesta que la única manera en la cual podrá hacerla su esposa, es repudiando a Anna. También le dice haber encontrado la manera de disolver el matrimonio. Aterrorizada, Giovanna no quiere saber más.
Un parque del Castillo, de día.
Percy se encuentra con Rochefort, el hermano de la Reina. El joven ha retornado de un exilio impuesto por el Rey y se lamenta por haber perdido el amor de Anna.
Aparecen la Reina y el Rey, este último dispuesto a salir de cacería. Enrico le aclara a Percy que su exilio ha sido levantado por insistencia de su esposa. En realidad, la pasión entre la reina y el caballero se ha vuelto a encender. De acuerdo con su plan Enrico ordena a Hervey espiar a ambos, luego parte y Anna se retira a sus aposentos.
Antesala del aposento de Anna
El paje Smeton observa una imagen de la Reina, que guarda celosamente. Escucha rumores y se esconde, cuando aparece Anna seguida por su hermano, quien le pide que consienta un encuentro con Percy. Ella consiente el pedido. Entra Percy, que le insiste en un amor que no puede ser correspondido. El caballero, despechado, saca su espada para quitarse la vida, pero entra Smeton, que confundido interpreta el intento de suicidio como un atentado contra su señora y opta por defenderla. Anna se desmaya y todos acuden por los ruidos que produce el altercado. El Rey, satisfecho con la marcha de su plan, acusa a su mujer públicamente de adulterio. Smeton ha dejado caer sin querer la imagen de Anna, que es considerada como prueba de traición. Todos son arrestados.
Acto II
Antesala del aposento donde Anna es custodiada.
Anna reza y en su desgracia pasa por las mismas penas que en el pasado debió soportar la antigua reina Catalina de Aragón, de la cual ella fue a su vez dama de compañía y amiga. Aparece Giovanna y le implora que se confiese culpable: solo de esa manera se podrá divorciar de Enrico y salvará su vida. Anna rechaza la propuesta y el llanto de su dama revela la verdad: ella es la amante del Rey. Giovanna implora perdón a la reina, quien se lo concede.
Antesala del Consejo de los Pares
Percy y Anna serán llevados ante el tribunal. Según Hervey, Smeton, creyendo salvar a la Reina, confesó y confirmó la sospecha del adulterio. Condenada Anna, se cumple el plan de Enrico. Esta le pide a su marido ser ejecutada rápidamente y no sufrir la humillación de un juicio. Percy dice haber sido su marido en el pasado, antes del matrimonio con el soberano. Anna lamenta haber elegido a Enrico en lugar del caballero. El Rey, enfurecido, los conduce al tribunal. En su ira llega a pensar incluir en su venganza a la niña que tuvo con Anna, que no es otra que la futura Isabel I. Aparece Giovanna dispuesta a dejar la corte, y muestra arrepentimiento por haber traicionado a su amiga la Reina. La ira del Rey va en aumento, pero Giovanna le dice que lo ama y por su amor le suplica levantar la pena de muerte a Anna. Llega Hervey y anuncia el veredicto del Consejo de los Pares: la Reina, Percy, Smeton y Rochefort serán ejecutados. Giovanna y los nobles imploran clemencia al Rey, pero es inútil.
La prisión de la Torre de Londres
Hervey les comunica a Percy y a Rochefort que el Rey les ha levantado la pena de muerte. Como la Reina no ha sido beneficiada con gracia semejante, están dispuestos a morir.
Las damas de compañía se lamentan por el destino de su señora, que después de la sentencia se ha vuelto loca. Aparece vestida con harapos y divaga. Entran Percy, Rochefort y Smeton, listos para morir. El paje trata de obtener el perdón de Anna por lo que hizo, pero esta no lo escucha. La mujer cae en el delirio, mientras los cañones anuncian la boda entre Enrico y Giovanna. Los estruendos la traen a la realidad y en lugar de maldecir a la pareja real los perdona. Extenuada, cae muerta. Acto seguido los otros tres son conducidos al suplicio.
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